Establecimiento de cultivos de raíces pilosas de Agastache mexicana y determinación del contenido de tilianina, ácido oleanólico y ácido ursólico

RESUMEN Ante la necesidad de obtener fuentes sustentables de compuestos bioactivos que contribuyan en el control y tratamiento de enfermedades con alta prevalencia en México, como son la diabetes e hipertensión, en la presente Tesis se presenta el primer reporte de una metodología de transformación genética para la generación de raíces pilosas de Agastache mexicana productoras de compuestos bioactivos. El establecimiento de cultivos de raíces pilosas de A. mexicana se realizó a través de la transformación genética mediada por Agrobacterium rhizogenes. Para ello, se inocularon plántulas cultivadas in vitro con las cepas de A. rhizogenes ATCC15834, A4 y K599. La mayor eficiencia de transformación (100%) se obtuvo con la cepa ATCC15834 y la integración en el genoma de las raíces de los genes rol A, rol B y rol C fue confirmada en 9 líneas a través de PCR. Además, se evaluó el efecto de la concentración de sacarosa (0, 15, 30, 40, 50 y 60 g/l) en el crecimiento de las raíces adventicias en condiciones in vitro. Los resultados indican que hay una relación lineal entre el incremento de la fuente de carbono y el crecimiento de las raíces. Por medio de cromatografía en capa fina y HPLC, se determinó que las líneas de raíces transformadas no producen niveles detectables de tilianina. Sin embargo, se identificaron y cuantificaron los ácidos ursólico y oleanólico. En la línea ATCC15834 1.1.4 fue detectada la máxima concentración de ácido oleanólico (2.63 ± 0.06 mg/g de peso seco) y ácido ursólico (1.844 ± 648 mg/g de pesos seco). Los resultados de este estudio cimentan las bases para el desarrollo de un sistema de producción de compuestos bioactivos a partir de cultivos de raíces pilosas de A. mexicana.